文献类型： 中文期刊

作者： 黄志深 ¹ ; 王庆 ² ; 吴斯宇 ² ; 周文礼 ¹ ; 王英英 ² ; 尹纪元 ² ; 李莹莹 ² ;

作者机构： 1.天津农学院水产学院

2.中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业农村部渔药创制重点实验室/广东省水产动物免疫技术重点实验室

关键词： 草鱼（Ctenopharyngodon idella）;层粘连蛋白受体;稳定表达细胞系;基因Ⅱ型;GCRV

期刊名称： 淡水渔业

ISSN：

年卷期： 2021 年 004 期

页码： 21-26

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过构建草鱼LamR（Ctenopharyngodon idella LamR,CiLamR）真核表达质粒,转染GCRV非敏感细胞系鲤鱼上皮细胞（EPC）和敏感细胞系草鱼肾细胞（CIK）,利用G418筛选获得稳定表达CiLamR的细胞,经Western Blot验证CiLamR稳定表达细胞系的构建。采用Ⅱ型GCRV分别接毒CiLamR稳定表达EPC和CIK,检测接毒后Ⅱ型GCRV拷贝数差异,研究草鱼37 kDa/67 kDa层粘连蛋白受体（37 kDa/67 kDa laminin receptor, LamR）对Ⅱ型GCRV增殖的影响。结果显示:经PCR扩增获得927 bp CiLamR完整开放阅读框（ORF）,并成功克隆进入真核表达质粒pEYFP-Mem,获得pEYFP-Mem-CiLamR重组质粒,转染并经过G418筛选后获得约80%阳性荧光的细胞。Western Blot证实稳定表达CiLamR的EPC和CIK细胞系构建成功。以不同初始浓度接种EPC-pEYFP-Mem、EPC-pEYFP-Mem-CiLamR细胞均未检测到Ⅱ型GCRV增殖,CIK-pEYFP-Mem、CIK-pEYFP-Mem-CiLamR可检测到病毒增殖,但是增殖量无明显差异。结果表明:CiLamR蛋白对基因Ⅱ型GCRV增殖无明显影响。