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油菜AP2/ERF-B4类转录因子克隆及表达载体的构建

文献类型: 中文期刊

作者: 庄静 1 ; 熊爱生 2 ; 乔玉山 3 ; 章镇 3 ; 姚泉洪 4 ;

作者机构: 1.上海市农业科学院作物育种栽培研究所

2.上海市农业科学院生物技术研究所

3.南京农业大学园艺学院

4.上海市农业科学院生物技术研究中心

关键词: 转录因子;AP2/ERF-B4亚族;RT-PCR;生物信息学;甘蓝型油菜;沪油15

期刊名称: 西北植物学报

ISSN: 1000-4025

年卷期: 2008 年 28 卷 08 期

页码: 1521-1532

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 利用油菜UniGene数据库,以拟南芥转录因子保守序列为探针,通过电子克隆方法分离得到一个UniGene库Bna.17538,进一步序列拼接得到一个油菜AP2/ERF-B4亚族的转录因子BnaERFB4-1,长度为672 bp,并进行了相关的生物信息学分析.结果显示BnaERFB4-1是亲水性蛋白,蛋白质三级结构与拟南芥RAP2.6L非常相似,蛋白质无序化程度大于拟南芥RAP2.6L.设计引物通过PCR和RT-PCR方法分别从甘蓝型油菜沪油15幼苗的DNA和cDNA中分离了BnaERFB4-1基因,命名为BnaERFB4-1-Hy15.序列测定和分析显示,来源于沪油15的BnaERFB4-1-Hy15基因与电子克隆的基因序列差异很小,有3个氨基酸位点不同,存在一个内含子.将BnaERFB4-1-Hy15基因通过BamHⅠ和SacⅠ酶切后分别插入酵母表达载体YK3302和植物双元表达载体pYF1404的相应位置,构建了BnaERFB4-1-Hy15基因的酵母体内结合和植物转化载体,为深入研究该基因在油菜抗逆调控中的作用奠定了基础.

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