文献类型： 中文期刊

作者： 夏叶 ¹ ; 郭佳宏 ¹ ; 廖学文 ¹ ; 李春华 ¹ ; 易建中 ¹ ; 凌红丽 ¹ ; 蒋贻海 ¹ ; 缪德年 ¹ ;

作者机构： 1.上海市农业科学院上海种猪工程技术研究中心;青岛蔚蓝生物股份有限公司

关键词： 猪圆环病毒2d亚型;ORF2基因;可溶性表达;病毒样颗粒

期刊名称： 上海农业学报

ISSN： 1000-3924

年卷期： 2017 年 06 期

页码： 43-48

收录情况： CSCD

摘要： 为了制备猪圆环病毒2d亚型病毒样颗粒,根据GeneBank上公布的PCV2d亚型HB-MC1株的序列和大肠杆菌密码子使用频率表优化合成PCV2d亚型ORF2基因,克隆到原核表达载体pET30a(+),获得重组表达质粒pET30a-Cap2d,将该质粒转化入Rosetta(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达。利用SDS-PAGE对目的基因的表达及产物的可溶性进行分析,利用Western blot和琼脂凝胶免疫扩散试验鉴定重组蛋白的免疫原性,并利用电镜技术鉴定重组Cap2d蛋白形成的病毒样颗粒。SDS-PAGE结果表明PCV2d的ORF2基因在大肠杆菌中得到了高效可溶性表达;电镜下观察超声破碎后的上清中存在大量直径约17 nm的病毒样颗粒;Western blot和琼脂凝胶免疫扩散试验结果表明该可溶性蛋白可与猪PCV2阳性血清特异性结合,具有较好的免疫原性。本研究为制备PCV2d亚单位疫苗和相关检测试剂盒奠定了基础。