文献类型： 中文期刊
作者： 陈高云 1 ; 刘敏 1 ; 叶凯 2 ; 张元忠 1 ; 涂振东 2 ; 于孟斌 1 ;
作者机构： 1.防化指挥工程学院生物防护教研室
2.新疆农业科学院
关键词： 木糖醇脱氢酶;组成型启动子;诱导型启动子;木酮糖;发酵
期刊名称： 酿酒科技
ISSN： 1001-9286
年卷期： 2011 年 11 期
页码： 32-37
摘要： 通过RT-PCR方法克隆得到Candida tropicalis木糖醇脱氢酶基因xyl2,将该基因连入酵母表达载体pYES2的诱导型启动子GAL1下,构建表达质粒pYES2-xyl2;同时用从Pichia pastoris中克隆获取的甘油醛磷酸脱氢酶基因GAP换下GAL1基因,构建含组成型启动子GAP基因的表达质粒pYES2-GAP-xyl2;通过电转化法将其依次转入酿酒酵母S.cerevisiae INVSc1,山梨醇培养基上筛选的转化子经木糖醇梯度驯化培养,筛选出1株耐木糖醇浓度为20%的酿酒酵母重组菌株ZCX4和1株在半乳糖诱导下耐木糖醇浓度为15%的重组菌株YDX2。酶活测定表明,重组菌株ZCX4比酶活0.621 U/mg(蛋白),是YDX2比酶活的2.29倍。摇瓶发酵结果显示,重组菌株ZCX4木糖醇消耗76.46 g/L,木糖醇消耗率为76.46%,是重组菌株YDX2木糖醇消耗率的1.63倍,说明木糖醇脱氢酶实现了高效表达。
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