文献类型： 中文期刊

作者： 仝晴晴 ¹ ; 杨利 ² ; 乔绪稳 ² ; 陈瑾 ² ; 张元鹏 ² ; 郑其升 ² ; 牛家强 ¹ ; 侯继波 ² ;

作者机构： 1.西藏农牧学院动物科学学院

2.江苏省农业科学院 国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 断裂型内含肽;GEM;C末端剪切;纯化

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2019 年 27 卷 003 期

页码： 9-15

摘要： 本研究分别构建含有断裂型内含肽(inteins)C端与犬α干扰素融合基因(C*-CaIFN-α)、断裂型内含肽N端与锚钩蛋白(protein anchor,PA)融合基因(NC1A-PA3)的重组表达质粒,利用IPTG诱导表达.通过GEM颗粒(gam-positive baterial enhancer matrix particles)与PA3之间的特异性结合,将NC1A-PA3蛋白捕获到GEM颗粒上,再利用内含肽的N端与C端的结合,获得GEM-PA3-NC1A-C*-CaIFN-α.在DTT或EDTA存在情况下,内含肽C末端自我剪切,获得纯化的犬α干扰素重组蛋白CaIFN-α.通过微量细胞病变抑制方法测定CaIFN-α蛋白的活性.结果表明,两种重组蛋白均有可溶形式表达,GEM/inteins纯化系统效果良好;纯化的犬α干扰素CaIFN-α对水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的抗病毒活性为3.0×106 U/mL.本研究建立的基于GEM展示平台的蛋白纯化系统,将非层析标签与断裂内含肽系统相结合,为快速有效地纯化重组蛋白提供了一种方法.