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牛Oct4基因克隆及其逆转录病毒表达载体的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 陈冬梅 1 ; 吕长荣 2 ; 辛晓玲 3 ; 窦忠英 4 ;

作者机构： 1.西北农林科技大学动物医学院

2.陕西省农业分子生物学重点实验室

3.国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心

4.河南省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： Oct4基因;克隆;逆转录病毒载体pMSCV;牛

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2010 年 18 卷 03 期

页码： 124-130

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了克隆奶牛Oct4基因开放性阅读框全序列,并建立高效、稳定产生逆转录病毒质粒pMSCV-Oct4的包装细胞株。我们以50～60日龄的胎牛原始生殖嵴为材料,用RT-PCR的方法扩增出牛Oct4基因全序列,全长为1083bp与GenBank公布的序列的同源性为99.4%。将其插入到逆转录病毒载体pMSCVneo的多克隆位点,获得重组逆转录病毒质粒pMSCVneo-Oct4。鉴定正确后,通过Lipofectamine2000将其转导入包装细胞PT67,用含有G418的培养液进行抗性筛选,获得阳性细胞克隆。细胞上清经过RT-PCR、透射电镜及病毒滴度测定等方法鉴定,证实所包装病毒存在,其滴度值为8.83×107cfu/mL。试验结果表明我们已获得携带牛Oct4基因的高滴度感染性逆转录病毒。

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