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草鱼TGF-β1、Smad4基因的克隆及真核过表达和RNA干扰表达载体的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 张好放 1 ; 郁二蒙 1 ; 王广军 1 ; 余德光 1 ; 李志斐 1 ; 谢骏 1 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所

关键词： 草鱼;克隆;真核表达载体;RNA干扰

期刊名称： 中国农业大学学报

ISSN： 1007-4333

年卷期： 2017 年 22 卷 04 期

页码： 120-128

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究TGF-β1/Smad4信号通路在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌肉发育过程中的作用机制,首先克隆了草鱼TGF-β1、Smad4基因开放阅读框(ORF,Open reading frame)序列各1 134和1 644bp。其次,在TGF-β1、Smad4序列两端分别加上相应的酶切位点,同时对pcDNA3.1(+)真核表达载体进行双酶切,将带酶切位点的片段正向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建TGF-β1、Smad4基因的真核过表达载体pcDNA3.1(+)-TGF-β1、pcDNA3.1(+)-Smad4。另一方面,根据TGF-β1、Smad4基因序列全长分别设计3对长度为48bp的shRNA,然后将构建好的shRNA插入到载体pRNA-U6.1/Neo中,即可成功构建TGF-β1、Smad4基因的RNA干扰表达载体pRNA-U6.1/Neo-TGF-β1和pRNA-U6.1/Neo-Smad4。

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