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表达绿色荧光蛋白重组乳酸杆菌的构建及电击转化条件

文献类型： 中文期刊

作者： 田兴山 1 ; 张玲华 1 ; 周风珍 1 ; 李国立 1 ; 孙晓刚 1 ;

作者机构： 1.广东省农业科学院农业生物技术研究所

关键词： 绿色荧光蛋白;重组乳酸杆菌;质粒构建;电击

期刊名称： 华南农业大学学报

ISSN： 1001-411X

年卷期： 2005 年 26 卷 03 期

页码： 117-119

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 应用DNA重组技术构建了表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组乳酸杆菌.将pGFP2质粒中的绿色荧光蛋白基因切下,克隆进表达载体质粒pThioHisB的NcoⅠ和SacⅠ位点之间,构建成重组表达质粒pThioGFP,然后转化大肠杆菌BL21.从BL21中提取重组质粒,用电击法转化乳酸杆菌Lac1001,当细菌处于D600nm为0.6的生长期时,使用PEB作为电击缓冲液,对100μL体积的细胞悬液在电容25μF,电阻200Ω,电压2.2kV的电击条件进行完整质粒转化可得到较高的转化率.电击转化后Lac1001于LB培养基上呈绿色,在荧光透射仪下观察,整个菌体发绿色荧光.构建的重组乳酸杆菌能够稳定表达绿色荧光蛋白.

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