文献类型： 中文期刊

作者： 明飞平 ¹ ; 杨军 ¹ ; 朱进美 ¹ ; 邝哲师 ² ; 李华周 ³ ; 夏枫耿 ⁴ ; 叶明强 ² ; 王候光 ³ ; 赵祥杰 ² ;

作者机构： 1.华南农业大学生命科学学院广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室

2.广东省农科院农业生物技术研究所

3.广州市良种猪场

4.广州市微生物研究所

关键词： 抗菌肽;PR39,pPIC9K;5'UTR;分泌表达;抗菌活性

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2013 年 33 卷 12 期

页码： 86-91

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:在毕赤酵母SMD1168中高效表达抗菌肽PR39,并检测其抗菌活性。方法:根据毕赤酵母密码子偏爱性,人工合成4条寡核苷酸片段,通过重叠PCR获得PR39核苷酸序列,将其插入酵母表达载体pPIC9K,重组表达质粒pPIC9K-PR39经PCR敲除PR39 5'端多余的长度为24bp的核苷酸序列得到pPIC9K-PR39-D,再经PCR、酶切连接构建5'UTR已删除8个核苷酸GGATCCAA的新型毕赤酵母表达载体pPIC9K-PR39-D-E;pPIC9K-PR39-D-E转化到毕赤酵母SMD1168,经PCR鉴定及G418筛选,用0.5%的甲醇诱导表达,Tricine-SDS-PAGE分析,再利用琼脂糖扩散法测定发酵上清的抗菌活性,表达产物经反相层析及SP-Sepharose层析柱纯化测定其表达量。结果:经Tricine-SDS-PAGE检测,在4.7kDa左右处可见目的蛋白表达条带,纯化后测定蛋白浓度表达量约为175.6mg/L。获得的抗菌肽PR39对E.coli DH5α,有明显抑菌活性。结论:经改建后新型毕赤酵母表达载体pPIC9K-PR39-D-E在毕赤酵母中可高效表达抗菌肽PR39,为以后深入研究毕赤酵母高效表达抗菌肽奠定了基础。