文献类型： 中文期刊

作者： 张辉 ¹ ; 文科 ² ; 黄金林 ² ; 胡茂志 ² ; 申峻松 ² ; 潘志明 ² ; 焦新安 ² ;

作者机构： 1.扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室

2.扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室;江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所;扬州大学测试中心

关键词： ESAT-6;嵌合蛋白;鞭毛蛋白;佐剂;Th1型应答

期刊名称： 细胞与分子免疫学杂志

ISSN： 1007-8738

年卷期： 2011 年 27 卷 04 期

页码： 377-381

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:研究嵌合形式表达的鞭毛蛋白对结核分枝杆菌(MTB)抗原ESAT-6的免疫佐剂效应。方法:用PCR方法扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白基因fliCi及MTB抗原ESAT-6编码序列,通过重叠PCR将ESAT-6编码序列插入fliCi的高变区域,构建嵌合鞭毛基因片段fliC/esa。t将fliC/esat片段分别插入原核表达载体pET,构建pET-fliC/esat质粒。将ESAT-6编码序列插入原核表达载体pBCX的多克隆位点,构建原核表达质粒pBCX-esat。以质粒pET-fliC/esat及pBCX-esat分别转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基1-1硫代-β呋喃半乳糖苷诱导融合的嵌合蛋白fliC/esat及ESAT-6蛋白的表达。以抗ESAT-6 mAb HYB 076-08为一抗,通过W estern b lot鉴定嵌合蛋白fliC/esat及ESAT-6蛋白。以两种蛋白分别在体外刺激骨髓树突状细胞(BMDCs),通过FACS分析共刺激分子CD40、CD80、CD86和CD54的表达,同时用ELISA检测前炎性因子IL-12p70表达的水平。此外,以两种蛋白分别免疫C57BL/6小鼠,运用ELISPOT法分析ESAT-6特异的IFNγ-及IL-4分泌细胞的产生。结果:嵌合蛋白及ESAT-6蛋白均可溶性表达,相对分子质量(Mr)约为64000和39000。Western blot的结果显示,fliC/esat嵌合蛋白及ESAT-6蛋白均具有良好的反应原性。与ESAT-6蛋白相比较,fliC/esat嵌合蛋白在体外能诱导BMDCs成熟。IL-12p70的检测结果显示,fliC/es-at嵌合蛋白诱导BMDCs分泌的IL-12p70明显高于ESAT-6蛋白诱导分泌的IL-12p70(P<0.01)。体内实验结果表明,嵌合鞭毛蛋白免疫组能够显著增强ESAT-6特异性免疫应答,且免疫应答趋于Th1型。结论:鞭毛嵌合表达ESAT-6抗原,能够有效地上调BMDCs共刺激分子表达,增强ESAT-6特异性细胞的免疫应答,以嵌合形式表达的鞭毛蛋白对ESAT-6抗原具有诱导Th1型免疫应答的佐剂效应。