文献类型： 中文期刊

作者： 苏琦 ¹ ; 汤亚飞 ² ; 佘小漫 ² ; 蓝国兵 ² ; 于琳 ² ; 吴正伟 ¹ ; 李正刚 ² ; 何自福 ² ;

作者机构： 1.广东海洋大学滨海农业学院

2.广东省农业科学院植物保护研究所/广东省植物保护新技术重点实验室

关键词： 蒲瓜;病毒病;小RNA深度测序;RT-PCR检测;多重PCR方法

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2023 年 023 期

页码： 4684-4695

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】探明侵染广东省蒲瓜的病毒种类，建立一种可以同时检测多种蒲瓜病毒的RT-PCR检测方法，提高蒲瓜病毒种类鉴定效率，为蒲瓜病毒病的精准监测与防控提供依据。【方法】2018—2022年间，从广东省广州市、惠州市、清远市、汕头市和湛江市的蒲瓜主要种植区采集蒲瓜病毒病疑似样品78份，对采集的样品按照地区和症状进行分类，提取每份样品的总RNA，将一个地区具有相同症状样品的RNA等量混合后进行小RNA深度测序分析。根据小RNA深度测序分析结果，设计特异引物进行RT-PCR验证，从而明确侵染广东省蒲瓜的病毒种类。挑选6种检出率高、危害严重的蒲瓜病毒，根据GenBank数据库设计多重PCR检测引物，通过优化反应体系和反应条件，建立同时检测6种蒲瓜病毒的多重RT-PCR方法。【结果】从采集的78份蒲瓜疑似病毒病样品中，共检测到12种病毒，按照检出率从高到低分别为葫芦内源RNA病毒（Lagenaria siceraria alphaendornavirus,LSEV）（64.1%）、黄瓜绿斑驳花叶病毒（cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）（62.8%）、小西葫芦虎纹花叶病毒（zucchini tigre mosaic virus,ZTMV）（51.3%）、西瓜绿斑驳花叶病毒（watermelon green mottle mosaic virus,WGMMV）（43.6%）、西瓜病毒A（watermelon virus A,WVA）（32.1%）、番木瓜环斑病毒（papaya ringspot virus,PRSV）（19.2%）、小西葫芦黄花叶病毒（zucchini yellow mosaic virus,ZYMV）（9.0%）、瓜类蚜传黄化病毒（cucurbit aphid-borne yellows virus,CABYV）（7.7%）、中国南瓜曲叶病毒（squash leaf curl China virus,SLCCNV）（7.7%）、瓜类褪绿黄化病毒（cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV）（5.1%）、瓜类黄矮失调病毒（cucurbit yellow stunting disorder virus,CYSDV）（3.8%）、甜瓜黄斑病毒（melon yellow spot virus,MYSV）（1.3%）。78份样品中，复合侵染率高达80.8%，其中2、3、4、5、6和7种病毒复合侵染的检出率分别为14.1%、16.7%、23.1%、17.9%、7.7%和1.3%。在多重RT-PCR体系中先加入WVA+CCYV+ZTMV+PRSV引物，12个反应后再加入CGMMV+WGMMV引物，引物体积依次为WVA 0.5μL、CCYV 0.5μL、CGMMV 0.4μL、WGMMV 0.4μL、ZTMV 0.6μL、PRSV 0.6μL，从而确立了一种同时扩增6种病毒的多重RT-PCR检测方法。【结论】危害广东省蒲瓜的主要病毒有12种，其中CGMMV、ZTMV、WGMMV、WVA为优势病毒；复合侵染现象较普遍，以3、4和5种病毒的复合侵染形式占比较高；研发出一种同时检测蒲瓜上6种病毒的多重RT-PCR检测技术，提高了蒲瓜病毒种类鉴定效率。