文献类型： 中文期刊

作者： 杨双娟 ¹ ; 原玉香 ¹ ; 魏小春 ¹ ; 王志勇 ¹ ; 赵艳艳 ¹ ; 姚秋菊 ¹ ; 张晓伟 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院园艺研究所

关键词： 大白菜;KASP;反应体系优化

期刊名称： 园艺学报

ISSN： 0513-353X

年卷期： 2018 年 12 期

页码： 2442-2452

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以大白菜基因组DNA为模板,对影响竞争性等位基因特异性PCR(Kompetitive allele specific PCR,KASP)的反应体积、引物浓度和DNA模板用量等3个参数进行优化,建立了适用于大白菜的KASP反应体系。96孔模块最佳反应体系中,总反应体积为8μL,其中模板DNA(60～80 ng·μL~(-1))1μL,KASP Master mix(2×)4μL,引物混合物(50μmol·L~(-1))0.14μL,ddH_2O 3μL。384孔模块最佳反应体系中,总反应体积为4μL,其中模板DNA(60～80 ng·μL~(-1))1μL,KASP Master mix(2×)2μL,引物混合物(50μmol·L~(-1))0.07μL,ddH_2O 1μL。利用不同引物和不同的大白菜材料对优化的反应体系进行验证,均获得了较好的KASP-SNP分型,验证了该优化体系的稳定性。该反应体系可以用于大白菜遗传多样性研究、基因定位、遗传图谱构建等遗传学研究。