文献类型： 中文期刊
作者： 罗胜军 1 ; 黄忠 1 ; 周秀蓉 1 ; 贾春铃 1 ; 袁洁 1 ; 魏文康 1 ;
作者机构： 1.广东省农业科学院兽医研究所
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;核蛋白;原核表达
期刊名称： 中国畜牧兽医
ISSN： 1671-7236
年卷期： 2010 年 37 卷 01 期
页码： 64-67
收录情况： 北大核心
摘要： 通过RT-PCR技术从细胞毒液中扩增N蛋白cDNA,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,所获得的重组质粒pET-28a-N经酶切鉴定正确后,将其转化入表达菌E.coliBL21plysS诱导表达,用SDS-PAGE与Western blotting对表达产物进行鉴定。结果表明,通过RT-PCR扩增获得长度为372 bp的N蛋白基因,诱导表达重组质粒pET-28a-N,经SDS-PAGE检测,IPTG终浓度为1 mmol/L时,诱导4 h蛋白表达量最高,出现分子质量约为18 ku的目的蛋白带,与N蛋白的理论值相符。经Western blotting检测,该表达产物可与PRRSV阳性血清发生特异性反应。获得的PRRSV N蛋白为建立针对该病毒抗体的间接ELISA检测方法,以及为进一步研发PRRS抗体检测试剂盒奠定了基础。
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