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长牡蛎精子膜蛋白的提取及其部分生化性质的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 刘丽燕 1 ; 杨爱国 1 ; 王清印 1 ; 周丽青 1 ; 刘志鸿 1 ;

作者机构： 1.农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所

关键词： 长牡蛎;精子膜蛋白;糖蛋白;脂蛋白

期刊名称： 中国水产科学

ISSN： 1005-8737

年卷期： 2007 年 14 卷 06 期

页码： 889-895

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从提取时间和TritonX-100浓度两个方面对长牡蛎(Crassosstrea gigas)精子膜蛋白提取条件进行优化,确定最佳提取条件:将精液150 g离心去除精原细胞,经PBS缓冲液和Tris-HCl缓冲液清洗后,3000 g离心10 min(4℃)得精子悬液;然后加入3倍体积含1%TritonX-100的膜蛋白提取液,冰浴振摇1 h;50000 g离心15 min(4℃),收集上清液即为精子膜蛋白溶液。SDS-PAGE电泳后,考马斯亮蓝R-250染色检测到21种膜蛋白,分子量在26~156 kD之间,PAS染色检测到糖蛋白有14种,苏丹黑B染色检测到脂蛋白有17种,其中有13种膜蛋白既是糖蛋白又是脂蛋白。实验结果还发现1种分子量为38 kD的r16膜蛋白既为糖蛋白又为脂蛋白,且高碘酸-Shiff试剂和苏丹黑B染色最深,条带最清晰,蛋白丰度最高,与此相对的分子量为55 kD的r12膜蛋白,考马斯亮蓝R-250染色也较深,条带清晰,但其糖蛋白和脂蛋白染色相对r16膜蛋白较浅,说明r16和r12两种膜蛋白其蛋白丰度相差不大,其糖基化程度及脂化程度可能相差较大,此两种膜蛋白有待于进一步分离纯化。此研究结果可为长牡蛎精子膜蛋白在精子发生和受精过程中作用的研究提供基础资料。

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