文献类型： 中文期刊

作者： 邢珍娟 ¹ ; 董立明 ¹ ; 刘娜 ¹ ; 夏蔚 ¹ ; 李葱葱 ¹ ; 谢彦博 ¹ ; 李飞武 ¹ ;

作者机构： 1.吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所

关键词： 转基因作物;除草剂抗性基因;多重PCR;筛选检测

期刊名称： 核农学报

ISSN： 1000-8551

年卷期： 2019 年 02 期

页码： 255-261

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立耐除草剂转基因作物的高通量检测方法,本试验以目前生产上广泛应用的5种除草剂抗性基因dmo、pat、CP4EPSPS、bar和aad1为靶标进行多重PCR(MPCR)研究。通过引物适用性测试、反应体系中的不同引物浓度和反应程序中的退火温度测试、灵敏度和特异性验证等,建立了能同时检测5种除草剂抗性基因的MPCR检测方法。结果表明,当dmo、pat、CP4EPSPS、bar、aad1基因的检测引物终浓度分别为0.2、0.2、0.3、0.4、0.2μmol·L~(-1),退火温度为63℃时5种靶标扩增效果较好,且特异性条带清晰且均一。此外,MPCR检测方法具有较好的特异性,对每种靶标的检测灵敏度均可达到0.1%。适用性测试结果显示,MPCR检测方法可对含有5种除草剂抗性基因的多种转基因作物的单个品系或多个品系混合物进行筛选检测。无假阳性和假阴性结果表明,MPCR检测方法对实际样品具有很好的适用性。本试验结果为筛选高效耐除草剂转基因作物检测技术提供了一定的理论依据。