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异源表达【FeFe】氢酶的基因工程大肠杆菌的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 于瑞嵩 1 ; 宗文明 2 ; 周志华 3 ;

作者机构： 1.上海市农业遗传育种重点实验室上海市农业科学院畜牧兽医研究所

2.中国科学院合成生物学重点实验室中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所

3.安徽农业大学工学院

关键词： 【FeFe】氢酶;异源表达;重组大肠杆菌

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2011 年 51 卷 11 期

页码： 1468-1475

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】探讨一种构建异源表达【FeFe】氢酶的重组大肠杆菌的新方法。【方法】通过同源重组,依次将来源于丙酮丁醇梭菌中促进【FeFe】氢酶成熟的3个辅助基因hydE、hydF和hydG分别整合到大肠杆菌BW2513-10(缺失氢酶基因)的丙酮酸甲酸脱氢酶(ybiW)、乳酸脱氢酶(ldh)和乙醇脱氢酶(adhE)编码基因位点上。在此基础上进一步将含有来源于丁酸梭菌的氢酶基因的表达载体转化上述重组菌,并对转化子的氢酶活性进行分析。【结果】PCR和RT-PCR的检测结果表明,3个辅助基因都整合到BW 2513-10基因组相应位点并能够正常转录;丁酸梭菌【FeFe】氢酶的活性表达表明,组成型表达3个辅助因子能够促进【FeFe】氢酶的成熟,并获得了异源表达【FeFe】氢酶的重组大肠杆菌菌株BW23113-15。【结论】利用同源重组整合至染色体特定部位的方法可以实现【FeFe】氢酶辅助基因的组成型表达,简化了【FeFe】氢酶在大肠杆菌中异源表达的程序。该系统也将为不同氢酶的活性筛选及在大肠杆菌中构建新的产氢代谢途径奠定基础。

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