文献类型： 中文期刊

作者： 闫光达 ¹ ; 马红玲 ² ; 徐力文 ² ; 邓益琴 ² ; 郭志勋 ² ; 冯娟 ² ;

作者机构： 1.天津农学院水产学院

2.中国水产科学研究院南海水产研究所/广东省渔业生态环境重点实验室

关键词： 神经坏死病毒;CRISPR/Cas12a;重组酶聚合酶扩增;快速检测

期刊名称： 南方水产科学

ISSN： 2095-0780

年卷期： 2025 年 21 卷 004 期

页码： 11-21

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 赤点石斑鱼神经坏死病毒（Red spotted grouper nervous necrosis virus, RGNNV）是危害中国海水养殖鱼类的主要病原体之一，尽早检出RGNNV是防控该病毒感染和减少养殖损失的关键措施。为建立快速检测RGNNV的方法，将重组酶聚合酶扩增（Recombinase polymerase amplification, RPA）技术与CRISPR/Cas12a（CRISPR，成簇规律间隔短回文重复序列；Cas12a,CRISPR相关蛋白）检测系统相结合，通过设计和筛选RPA引物与crRNA（CRISPR RNA），优化RPA反应条件与CRISPR/Cas12a检测体系，评估该方法的灵敏度与特异性。同时，对临床石斑鱼样本进行检测，并与行业标准《SC/T 7216—2022鱼类病毒性神经坏死病诊断方法》中规定的qPCR法进行一致性比较。结果显示，该检测方法最短可在45 min内得到结果，灵敏度为1.5×10～1拷贝·μL^-1，检测特异性良好，实际样本检测与行标qPCR法对比符合率为100%。研究建立的RPA-CRISPR/Cas12a-RGNNV检测方法具有快速、便捷、高灵敏度、强特异性和可视化检测结果等特点，为RGNNV的现场快速检测提供了新的技术手段。