文献类型： 中文期刊

作者： 尤永进 ¹ ; 葛艳 ¹ ; 陈波 ¹ ; 饶忠 ¹ ; 徐泉兴 ¹ ; 朱彩珠 ² ; 张强 ² ; 卢永干 ² ;

作者机构： 1.上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究分室

2.中国农业科学院兰州兽医研究所

关键词： 口蹄疫病毒;非结构蛋白;真核表达载体;克隆;表达

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2003 年 25 卷 03 期

页码：

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 设计、合成FMDV非结构蛋白 3B基因的PCR引物 ,并在引物 5’端和 3’端分别加入含BamHI和HindⅢ限制性酶切位点序列。以FMDV基因组RNA为模板 ,利用RT_PCR技术扩增 3B基因 ,得到的基因片段经BamHI/HindⅢ双酶切后与转座载体pFASTBACHTa连接 ,转化宿主菌DH10BAC ,在含庆大霉素、卡那霉素、X_gal、IPTG的LB平板上 37℃培养 2 4h ,提取白色菌落 ,从中提取重组穿梭载体Bacmid 3B ,与脂质体共同转染昆虫细胞sf9,得到重组杆状病毒 ,病毒经传代扩增后感染High 5细胞 ,表达目的蛋白———FMDV非结构蛋白 3B。SDS_PAGE及WesternBlot结果显示 ,本研究成功构建了Bacmid_3B重组表达载体 ,并在昆虫细胞中表达了NSP_3B蛋白 ,该表达产物可与FMDV感染的猪、牛血清产生免疫反应。