文献类型： 中文期刊

作者： 李学伍 ¹ ; 刘媛 ² ; 王丽 ² ; 邓瑞广 ² ; 赵东 ² ; 杨继飞 ² ; 柴书军 ³ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室;河南科技大学动物科技学院

2.;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室;河南科技大学动物科技学院

3.;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室;河南科技大学动物科技学院;

关键词： 马立克氏病病毒;传染性喉气管炎病毒;鸡痘病毒;DNA病毒;复合PCR

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2017 年 07 期

页码： 101-105

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 依据Gen Bank中注册的鸡马立克氏病病毒(MDV)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、鸡痘病毒(FPV)基因组核苷酸序列中的保守序列设计引物,3种病毒各设计3对引物,共计9对引物,经生物学软件筛选后,得到3对相互匹配较佳的引物。3对匹配引物经单一PCR验证后,优化复合PCR反应条件,确定最佳的退火温度、引物浓度和Taq DNA聚合酶浓度;经特异性、敏感性试验及简化PCR试验,建立简易复合PCR检测方法。复合PCR扩增出的3条带大小与预期一致,即228 bp(MDV)、400 bp(ILTV)、499 bp(FPV);建立的复合PCR方法能同时检测出100 fg MDV、ILTV、FPV的DNA。同时依据PCR技术原理,将经典的三温热循环改进为二温热循环试验,即将退火和延伸合并为一步(62℃),缩短了反应时间。建立的3种病毒的复合PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,可以用于临床病料的快速诊断。