文献类型： 中文期刊

作者： 朱孝珍 ¹ ; 刘昱诚 ¹ ; 张星星 ¹ ; 王立霞 ¹ ; 季春辉 ¹ ; 郭蕴 ¹ ; 才学鹏 ¹ ; 孟庆玲 ¹ ; 乔军 ¹ ;

作者机构： 1.石河子大学动物科技学院;新疆农垦科学院畜牧兽医研究所;中国农业科学院兰州兽医研究所

关键词： 单核细胞增生李斯特菌;lmo2486基因;分子特征;系统进化分析;蛋白表达

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2023 年 44 卷 001 期

页码： 36-42

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 克隆目的基因LMlmo2486,分析目的基因及其编码蛋白的分子特征,并验证其编码蛋白的反应原性,为进一步研究LM lmo2486的生物学特性奠定前期的基础.通过PCR扩增单核细胞增生李斯特菌(LM)新型转录调节因子lmo2486基因,对该基因进行测序,预测分析其编码蛋白质的二、三级结构、理化特性、蛋白结构域等分子特征,并进行遗传进化分析.PCR克隆lmo2486基因的抗原集中区lmo2486K,构建重组载体pET-32a(+)-lmo2486K转化至大肠埃希氏菌感受态细胞BL21(DE3)并使用IPTG低温诱导表达,利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测重组蛋白.结果显示,LM lmo2486基因全长1212 bp,共编码403个氨基酸;lmo2486基因编码的蛋白具有亲水性和跨膜结构,无信号肽,预测发现lmo2486含有PspC和DUF4097结构域.序列同源对比发现,LM lmo2486测序所得的核苷酸序列与LM不同分离株属于同一分支,亲缘关系较近,表明lmo2486基因在LM中高度保守.SDS-PAGE检测表明,重组蛋白Lmo2486K的分子质量约为64.6 ku,Western blot分析发现,Lmo2486K蛋白具有一定的反应原性.