文献类型： 中文期刊

作者： 黄瑜 ¹ ; 朱于敏 ² ; 董世娟 ² ; 于瑞嵩 ² ; 张源淑 ¹ ; 李震 ² ;

作者机构： 1.南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室

2.上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室

关键词： MDPV;vp3基因;原核表达;纯化;免疫荧光分析

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2015 年 31 卷 01 期

页码： 65-74

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 近年来,番鸭细小病毒出现新的流行趋势,估计与病毒基因变异有关,因此针对新流行毒株研发新的检测方法很有必要。本研究根据番鸭细小病毒(MDPV)2012年分离株SAAS-SHNH的全基因序列,设计了一对特异性引物,利用PCR技术扩增全长vp3基因,经鉴定正确后,进行同源性比对分析,同时将其克隆到PET28a载体,构建成PET28a-VP3原核表达载体,经转化及IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳和Western blotting分析,表达出与预期大小相符的63.1 k Da的蛋白,该蛋白可与临床采集的免疫过MDPV的番鸭血清结合,说明该蛋白可用于MDPV的血清学检测。将纯化后蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔源MDPV-VP3蛋白的多克隆抗体,制备的兔源血清能够与MDPV疫苗弱毒株及J3D6株VP3蛋白发生特异结合;MDPV感染原代鸭胚成纤维细胞(DEF)后,利用兔源血清作为一抗进行免疫荧光分析(IFA)分析,在DEF细胞核和细胞质内均能检测到VP3蛋白,表明利用VP3蛋白制备的抗血清可以用于MDPV免疫荧光分析细胞增殖病毒的检测。这为今后MDPV的快速检测提供了技术基础。