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流行性乙型脑炎病毒E基因的克隆、表达及初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 张雪寒 1 ; 何孔旺 1 ; 郭容利 1 ; 倪艳秀 1 ; 王芳 1 ; 俞正玉 1 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室

关键词： 乙型脑炎病毒;E基因;表达;间接ELISA

期刊名称： 中国病毒学

ISSN： 1003-5125

年卷期： 2005 年 05 期

页码：

收录情况： CSCD

摘要： 参照GenBank中的日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)SA14-14株序列设计了一对特异性引物,用PCR方法从SA14-14扩增E基因全长,然后克隆到pMD18-T载体中,转化宿主菌DH5a,提取阳性克隆质粒进行双酶切鉴定,将目的片段定向克隆到pET32a(+)中,转化入BL21(DE3),经IPTG诱导可表达分子量约73ka的蛋白,Western blotting试验呈阳性,表明E基因得到表达。以纯化的表达产物为核心抗原,猪抗JEV血清为一抗,HRP标记羊抗猪IgG抗体为二抗建立间接ELISA方法,并初步检测了一些血清样品,结果提示表达的蛋白具有很好的应用开发价值。

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