文献类型： 中文期刊

作者： 魏玉圆 ¹ ; 王伟 ² ; 翟少华 ² ; 毛丽萍 ² ; 皮文辉 ² ; 简子健 ³ ;

作者机构： 1.新疆农业大学动物医学学院;新疆农垦科学院畜牧兽医研究所

2.;新疆农业大学动物医学学院;新疆农垦科学院畜牧兽医研究所

3.;新疆农业大学动物医学学院;新疆农垦科学院畜牧兽医研究所;

关键词： Gibson Assembly连接法;狂犬病病毒;感染性cDNA;连接

期刊名称： 基因组学与应用生物学

ISSN： 1674-568X

年卷期： 2017 年 06 期

页码： 2170-2177

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究为高效构建狂犬病SRV9ψ区缺失株感染性cDNA克隆,在细胞内进行重组狂犬病病毒的拯救提供帮助。按照Isothermal in vitro recombination system or"Gibson Assembly"连接方法设计引物,分别扩增得到去除狂犬病SRV9标准疫苗株的伪基因区(ψ区)的首尾均存在互补序列的5个结构蛋白基因的目的片段。利用T5核酸外切酶、DNA聚合酶及T4连接酶的协同作用,两步即可获得狂犬病SRV9ψ区缺失株的感染性cDNA。本研究利用Gibson Assembly连接法成功高效构建了狂犬病SRV9ψ区缺失株的感染性cDNA。此方法避免了传统的酶切连接方法中繁琐的实验步骤,实现了多个基因片段间的无缝连接,大大提高了载体构建的效率,为进一步研究狂犬病病毒的基因功能提供高效的方法。同时也为Gibson Assembly法应用于其它载体的构建提供借鉴。