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香蕉果实采后抑制差减文库的构建与鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 徐碧玉 1 ; 苏伟 2 ; 金志强 2 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所,热带作物生物技术国家重点实验室,中国热带农业科学院热带生物技术研究所,热带作物生物技术国家重点实验室,中国热带农业科学院热带生物技术研究所,热带作物生物技术国家重点实验室 海口,571101,海口,571101,海口,571101

关键词： 抑制差减杂交;差异表达基因;香蕉果实

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2005 年 3 卷 04 期

页码： 56-59

收录情况： CSCD

摘要： 抑制差减杂交技术(suppressionsubtractivehybridization,SSH),是抑制PCR与差减杂交技术相结合而产生的。其优点是在差减杂交过程中使不同丰度cDNA的拷贝数差异趋于均衡,因此不同丰度的差异表达基因都能得到有效克隆,能有效分离低丰度的差异表达基因,避免了表达序列标签分析中高丰度基因重复测序的缺点。因此SSH技术被应用于植物差异表达基因的分离。香蕉果实采后成熟过程中发生一系列复杂的生理变化,这些变化涉及到许多基因的表达。为了研究香蕉果实采后与采前在基因表达上的差异,我们首次采用抑制缩减文库的方法,以分离香蕉果实在采后表达的基因。以采后0h的香蕉果实cDNA为驱动子,对香蕉果实采后48h果实cDNA为待测子,进行抑制缩减杂交,抑制缩减杂交产物与pGEM-TEasyVecter连接,转化E.coliDH5琢,构建了抑制缩减文库。该文库共包含312个克隆,采用PCR方法对文库进行了重组子的鉴定,共有302个重组子。该文库的构建成功为深入研究香蕉果实采后基因的表达奠定了基础,为研究香蕉果实采后成熟的分子生物学机理提供了一个新的思路。

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