文献类型： 中文期刊

作者： 朱和超 ¹ ; 梁婉 ² ; 范桂芳 ¹ ; 彭忠 ¹ ; 华琳 ¹ ; 汤细彪 ³ ; 陈焕春 ¹ ; 吴斌 ¹ ;

作者机构： 1.华中农业大学动物医学学院生猪健康养殖协同创新中心

2.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室

3.武汉科前生物股份有限公司

关键词： 伪狂犬病病毒(PRV);gE基因;杆状病毒Bac to Bac表达系统;间接免疫荧光抗体法(IDF)

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2019 年 008 期

页码： 1428-1434

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立高效灵敏的伪狂犬病病毒(PRV) gE蛋白的间接免疫荧光抗体诊断方法,本研究将PRV/HN/SMX/2012毒株gE蛋白的自身信号肽及胞外域片段克隆到pFastBacHT B载体上,构建重组质粒pFastBacHTB-gE,并转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经过3次蓝白斑筛选获得含有gE基因的重组杆粒rBacmid-gE.随后,将该杆粒转染至sf9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒rAcMNPV-gE.经Western blot和间接免疫荧光实验(IFA)进行鉴定分析,发现重组gE蛋白在sf9细胞中表达.利用该sf9细胞建立检测血清中gE抗体的间接免疫荧光抗体(IDF)方法,通过反应条件的优化发现,将血清和羊抗猪FITC-IgG分别进行1∶40和1∶2 000稀释时所建立的方法能针对血清中gE抗体产生较强的特异性荧光;通过与商业化的ELISA检测gI/gE试剂盒(IDEXX)比较,所建立的检测方法与商业化试剂盒的总符合率为93.18%(164/176),阳性结果符合率93.75%(120/128),阴性结果符合率91.67%(44/48),2种方法存在很强的一致性(Kappa=0.832,CI=95%);-20℃条件下保存2个月的稳定性和重复性良好.