文献类型： 中文期刊
作者： 卢翠玉 1 ; 李炎 1 ; 刘庆慧 2 ; 吕利群 1 ;
作者机构： 1.上海海洋大学水产与生命学院
2.中国水产科学研究院黄海水产研究所
关键词： 草鱼呼肠孤病毒;肿瘤坏死因子TNF-α;原核表达;多克隆抗体
期刊名称： 水生生物学报
ISSN： 1000-3207
年卷期： 2016 年 40 卷 03 期
页码： 481-487
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为了阐明免疫刺激诱导草鱼肿瘤坏死因子TNF-α的体外表达特征,克隆了草鱼TNF-α的c DNA,构建了原核表达载体p ET-32-TNF-α,并在大肠杆菌DH5α中表达了His6-TNF-α。利用亲和层析镍柱纯化表达重组蛋白后将其作为免疫原免疫小鼠制备了抗草鱼TNF-α多克隆抗体。免疫印迹实验显示,制备的抗体能特异性识别细胞内源性TNF-α。在此基础上,分别研究了GCRV(草鱼呼肠孤病毒)感染、免疫刺激物Poly(I:C)及LPS处理下不同时间点草鱼肾细胞CIK中TNF-α的表达情况,结果表明,TNF-α在草鱼肾细胞内翻译水平的表达量基本保持稳定。研究显示经典的TNF信号通路激活因子不能引起CIK细胞内TNF-α蛋白水平的显著变化。
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