文献类型： 中文期刊

作者： 王隆柏 ¹ ; 王晨燕 ² ; 吴学敏 ² ; 陈秋勇 ² ; 车勇良 ² ; 陈如敬 ² ; 周伦江 ³ ;

作者机构： 1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心

2.;福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心

3.;福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心;

关键词： 猪流行性腹泻病毒;PEDV;M基因;N基因;双基因表达

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2018 年 06 期

页码： 1249-1255

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在构建变异猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M和N双基因融合质粒,并分析表达蛋白免疫原性。通过扩增变异PEDV FJFQ2014毒株(GenBank登陆号KJ646580)的M基因和N基因,将M基因克隆至pEASY-Blunt E2(pE2)表达载体,构建出pE2-M质粒。利用同源重组原理,采用无缝拼接试剂盒将N基因克隆至E2-M片段,转化到Trans 1-T1感受态细胞中,构建出pE2-M-N融合双基因质粒并转化Transetta(DE3),表达出相应的融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blot验证蛋白的表达情况。将纯化的M-N融合蛋白皮下接种BLAB/c小鼠,通过ELISA方法检测融合蛋白的免疫原性。结果表明:扩增出M和N基因,成功构建了pE2-M质粒,并将E2-M基因与N基因进行有效连接,构建出pE2-M-N融合双基因质粒,表达出了具有免疫原性的M-N融合蛋白,该蛋白能够诱导小鼠产生相应的特异性抗体。变异PEDV的pE2-M-N双基因融合质粒的构建,为进一步开展变异PEDV的诊断技术和免疫学等研究,奠定良好基础。