文献类型： 中文期刊
作者： 刘明智 1 ; 叶星 1 ; 田园园 1 ; 马冬梅 1 ; 张莉莉 1 ; 迟妍妍 1 ; 邓国成 1 ;
作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所
关键词： 嗜水气单胞菌;外膜蛋白W;克隆;基因工程表达;免疫原性;IgM;保护率
期刊名称： 微生物学通报
ISSN： 0253-2654
年卷期： 2011 年 38 卷 03 期
页码： 437-445
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 从患暴发性败血病的草鱼病灶处分离鉴定了嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)Wp3菌株。以其基因组DNA为模板扩增外膜蛋白W基因(OmpW),该基因全长为865 bp,开放式阅读框(ORF)为615 bp,与标准株ATCC7966的OmpW基因的同源性为99.8%。根据ORF序列设计引物扩增OmpW成熟肽编码序列并将其插入到表达载体pQE30中,转化大肠杆菌,经诱导可表达分子量为24.7 kD的带His标签的融合外膜蛋白His-W。用此融合蛋白免疫草鱼,所得草鱼血清经ELISA分析显示呈现阳性反应,说明重组蛋白能诱导产生抗体。采用实时荧光定量PCR分析草鱼头肾组织IgM基因表达水平的变化,结果显示免疫组IgM的表达量均明显高于空白组,其中低浓度免疫组(2μg/g)与空白对照组的差异显著(P<0.05),说明融合蛋白可使草鱼产生良好的免疫应答并上调抗体基因表达、产生高效抗体。保护性实验显示,不同免疫剂量均可使免疫组获得较高保护率(57%?86%)。结果显示,重组嗜水气单胞菌外膜蛋白W可作为草鱼嗜水气单胞菌基因工程亚单位疫苗。
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