文献类型： 中文期刊

作者： 徐重新 ¹ ; 张霄 ¹ ; 张存政 ¹ ; 刘媛 ¹ ; 谢雅晶 ¹ ; 黄鹰 ² ; 刘贤金 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所

2.南京师范大学生命科学学院/江苏省微生物与功能基因组学重点实验室

关键词： Cry1B毒素;单链抗体;真核表达系统;酶联免疫分析

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2013 年 29 卷 05 期

页码： 985-991

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过构建pFastBacTMHT-A-scFv重组质粒,并将重组质粒化转DH10BacTMEscherichia coli感受态细胞,进行蓝白斑筛选,获得阳性克隆。PCR和基因测序检测证实挑取的白斑阳性单克隆存在完整、正确的单链抗体基因。提取阳性克隆中的重组杆状病毒穿梭载体(Bacmid-scFv)侵染sf9昆虫细胞,细胞发生明显病变特征。通过SDS-PAGE、Western blotting和间接竞争性ELISA等方法检测,发现单链抗体在sf 9昆虫细胞中表达成功,测得纯化后蛋白浓度为103.000 0μg/ml,Cry1B毒素对单链抗体的抑制中浓度(IC50)为1.010 0μg/ml,最低检测线IC10为0.011 3μg/ml,线性检测范围为0.500 0~10.000 0μg/ml。可溶性scFv对抗原类似物无交叉反应。