文献类型： 中文期刊

作者： 林杉 ¹ ; 陈宝麒 ² ; 田占伟 ² ; 刘贤侠 ² ; 杨华 ³ ; 赵宗胜 ² ;

作者机构： 1.石河子大学生命科学学院

2.石河子大学动物科技学院

3.新疆农垦科学院

关键词： 抑制素βA基因(INHβA);绵羊;RNA干扰(RNAi);卵巢颗粒细胞

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2015 年 35 卷 08 期

页码： 1345-1352

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 抑制素βA基因(inhibin-βA,INHβA)的表达与绵羊(Ovis aries)的产羔数有一定关系。为了观察INHβA对绵羊发情性状的影响以及在目的基因沉默后,引起的发情性状相关激素变化的情况,本研究利用RNAi技术构建载体干扰INHβA的表达。根据GenBank上绵羊INHβA(GenBank:NW_004080167.1)mRNA的序列设计干扰片段,通过酶切和测序验证,成功构建了4个INHβA基因RNAi质粒载体PLLU2G-shINHβA-1(I-1)、PLLU2G-shINHβA-2(I-2)、PLLU2G-shINHβA-3(I-3)、PLLU2G-shINHβA-4(I-4)和1个空载体(赛亚公司的PLLU2G)阴性对照;在成功分离卵巢颗粒细胞并建立培养体系后,利用Lip2000介导干扰载体转染细胞,通过荧光定量RT-PCR检测干扰前后INHβA的表达量。结果显示,4个干扰载体的干扰效率依次为34%,58%,39%,19%,其中I-2对INHβA表达的沉默效果最好。通过卵巢注射干扰载体I-2,检测干扰后绵羊血清INHβA、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌二酮(E2)的含量。结果显示,注射干扰载体后INHβA和FSH分别呈现明显的下降和上升波峰,而血清中LH和E2水平没有发生明显变化。