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一个植物半胱氨酸蛋白酶多克隆抗体的制备及其应用

文献类型： 中文期刊

作者： 彭琪琪 1 ; 羊健 1 ; 廖乾生 1 ; 张恒木 1 ;

作者机构： 1.浙江理工大学生命科学学院;浙江省农业科学院病毒与生物技术研究所

关键词： 半胱氨酸蛋白酶;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2018 年 06 期

页码： 881-885

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 半胱氨酸蛋白酶(cysteine proteinase,Cys P)是一类重要的蛋白酶家族,广泛参与植物多种生理过程。为了分析植物Cys P的特性,本实验首先通过RT-PCR技术从本氏烟中扩增获得了一个编码Cys P的基因(NbCys P)序列并连接至p EASYTM-T5 Zero载体,测序验证后亚克隆至原核表达载体p GEX-6P1,命名为p GEXNb Cys P;将其导入大肠埃希菌BL21plys S中诱导表达;重组表达的Nb Cys P融合蛋白经过亲和层析纯化,免疫兔子制备多克隆抗体,Western印迹分析显示,该抗体能和重组Nb Cys P蛋白发生强烈的免疫学反应且条带单一,表明所获得的Cys P抗体具有良好的特异性。上述结果为进一步鉴定植物Cys P的功能特性奠定了基础。

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