文献类型： 中文期刊
作者： 戴丽荷 1 ; 褚晓红 1 ; 路伏增 1 ; 黄孙平 1 ; 徐如海 1 ;
作者机构： 1.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江省畜禽遗传育种工程技术研究中心
关键词： 猪;ATGL基因;miRNA;双荧光素酶报告基因系统;3′UTR
期刊名称： 畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2015 年 46 卷 08 期
页码： 1281-1289
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 本试验旨在初步筛选出调控猪脂肪甘油三酯脂肪酶基因(ATGL)的miRNA。利用生物信息学分析预测10条靶向ATGL基因的猪miRNAs,然后通过装载含猪ATGL基因3′UTR序列来构建pMIR-Luc报告基因载体,以及通过装载含反向miRNA种子区对应的3′UTR序列来构建3个突变载体作为阴性对照,以pRL-TK载体作为内参,与候选miRNA模拟物共转染HEK 293T细胞,最终利用双荧光素酶报告基因法来检测荧光素酶活性。试验成功构建了含猪ATGL基因3′UTR序列的重组载体pMIR-ATGL-3′UTR,双荧光素酶报告基因试验显示sscmiR-769-3p、ssc-miR-1343、ssc-miR-7137-3p、ssc-miR-671-5p、ssc-miR-149能下调293T细胞中pMIR-ATGL-3′UTR的荧光素酶活性,而点突变试验证实了ssc-miR-1343与ssc-miR-7137-3p能通过与猪ATGL基因3′UTR上预测的种子区结合下调荧光素酶活性。结果表明,sc-miR-1343与ssc-miR-7137-3p通过靶向结合3′UTR对猪ATGL基因有下调作用。
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