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川楝素半抗原设计及其抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 罗利 1 ; 张静 2 ; 刘媛 3 ; 余向阳 3 ; 马志卿 1 ;

作者机构： 1.西北农林科技大学无公害农药研究服务中心

2.江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究中心

3.江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所

关键词： 川楝素;半抗原;多克隆抗体;ELISA

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2008 年 41 卷 08 期

页码： 2332-2338

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】获得抗川楝素的高灵敏度,高特异性多克隆抗体,建立川楝素的间接竞争酶免疫测定(IC-ELISA)方法。【方法】采用酯化反应合成川楝素的半抗原并经HRMS,NMR及IR鉴定;用混合酸酐法和活化酯法分别合成人工免疫抗原与包被抗原;通过免疫动物获得多克隆抗体。【结果】合成了琥珀酸单酰川楝素(TS)和戊二酸单酰川楝素(TG)2种半抗原,与载体蛋白BSA和OVA分别偶联制备了2种免疫原TS-BSA和TG-BSA,及2种包被原TS-OVA和TG-OVA。免疫后获得的2种抗体效价达6.4×104和3.2×105。经4种不同包被原-抗体组合优化,以(TS-Ab,TG-OVA)组合建立的川楝素IC-ELISA检测方法,线性检测范围为0.01～100μg·ml-1,检测限达0.03μg·ml-1,抑制中浓度为1.52μg·ml-1;以(TG-Ab,TG-OVA)组合建立的方法,线性检测范围为0.1～100μg·ml-1,检测限达0.11μg·ml-1,抑制中浓度为3.49μg·ml-1。水样中基于(TS-Ab,TG-OVA)组合的川楝素平均回收率为82.4%～106.0%,精密度为1.1%～14.3%。【结论】通过川楝素半抗原的合理设计,获得了高效价的抗川楝素多克隆抗体,建立了快速有效的川楝素IC-ELISA检测方法。

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