文献类型： 中文期刊
作者： 刘邓 1 ; 冉多良 2 ; 袁秀芳 3 ; 徐丽华 3 ; 牛登元 4 ;
作者机构： 1.新疆农业大学
2.新疆农业大学动物医学学院
3.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所
4.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所新疆农业大学甘肃农业大学
关键词： 猪流行性腹泻病毒;S基因;原核表达;免疫学活性
期刊名称： 黑龙江畜牧兽医
ISSN： 1004-7034
年卷期： 2010 年 03 期
页码： 19-22
收录情况： 北大核心
摘要： 为了获得具有免疫活性的猪流行性病毒S蛋白,试验参照GenBank中所收录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777株S基因序列设计1对特异性引物,去除信号肽,以PEDVCH/ZJ株为模板,通过RT-PCR扩增出目的基因,克隆入原核表达载体pET28a(+),转化到Top10感受态细胞中,测序并分析。结果表明:目的基因含有1个长966bp、编码322个氨基酸残基组成的多肽;与CV777株相比较,同源性为96.0%,但在398bp处缺失编码1个异亮氨酸的密码子,将重组质粒命名为pET-P-SP1;将pET-P-SP1转化到大肠杆菌E.coliBL21-DL3(Rosetta)中,在IPTG诱导下表达;通过SDS-PAGE表达出与预期大小相符的约35.6ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;表达产物占菌体蛋白的80%;表达蛋白能与抗猪流行性腹泻病毒高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫活性。
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