文献类型： 中文期刊
作者： 蒋智勇 1 ; 宋长绪 1 ; 王贵平 1 ; 高向阳 2 ; 赵亚华 2 ;
作者机构： 1.广东省农科院兽医研究所
2.华南农业大学生命科学院
关键词： PCV2ORF1;克隆;大肠杆菌表达
期刊名称： 动物医学进展
ISSN： 1007-5038
年卷期： 2004 年 25 卷 05 期
页码： 65-68
摘要： 根据GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)0RF1基因序列,设计合成了一对引物,对PCV2广东株(GD)ORF1基因进行PCR扩增,将扩增出的ORF1基因(942 bp)克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒,命名为pMD-ORF1。将ORF1的KpnⅠ和XbaⅠ双酶切产物插入原核表达载体pBAD／gⅢC,得到重组子,命名为pBAD／gⅢ-ORF1。测序分析表明克隆的ORF1与德国分离株AF201897核苷酸序列同源性高达99.5％。与其它PCV2核苷酸序列同源性为92.1％-99.9％,推导的氨基酸序列同源性为90.2％-99.5％。同时,测序结果表明所克隆的ORF1准确插入pBAD／gⅢC的多克隆位点,未改变读码框架。用L-Arabi-nose进行诱导表达,收集茵液进行SDS-PAGE和Western blotting分析,显示PCV2 ORF1在pBAD／gⅢC中获得了高效融合表达,其表达蛋白分子量约为4.1万。
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