文献类型： 中文期刊

作者： 陈徵婷 ¹ ; 可小丽 ¹ ; 陈刚 ² ; 黄丽芳 ³ ; 刘志刚 ¹ ; 卢迈新 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部热带亚热带水产资源利用与养殖重点试验室广东省水产动物免疫技术重点实验室

2.广东海洋大学水产学院

3.仲恺农业工程学院动物科技学院

关键词： 无乳链球菌;LrrG蛋白;密码子优化;重组蛋白;原核表达

期刊名称： 大连海洋大学学报

ISSN： 2095-1388

年卷期： 2021 年 006 期

页码： 920-928

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为高效获得可溶性无乳链球菌表面蛋白（LrrG）,通过密码子优化及构建LrrG基因优化后的pCzn1-LrrG重组表达载体,并转染至BL21（Plys）感受态细胞中,高效表达了无乳链球菌Streptococcus agalactiae（GBS）富含亮氨酸重复序列蛋白（LrrG）。根据大肠杆菌密码子偏好性,优化并人工合成LrrG全基因序列,经双酶切后插入至表达载体,将优化后的重组质粒pCzn1-LrrG转染至感受态细胞进行原核表达,经裂解和纯化后获得上清重组蛋白LrrG。结果表明:PCR扩增得到2 286 bp的优化LrrG基因片段,构建的重组质粒pCzn1-LrrG经双酶切获得约4 400 bp和2 286 bp两条片段,与预期值相符;重组载体的测序结果与优化后的基因碱基序列比对结果完全一致,编码的氨基酸序列未发生突变;SDS-PAGE和Western blot鉴定结果显示,获得了相对分子质量约为108 000的LrrG重组蛋白,与理论值相符,且优化后LrrG重组蛋白具有GBS抗原反应原性;通过亲和层析纯化LrrG上清蛋白后,发现优化后可溶性LrrG蛋白表达量较优化前提高了2.2～3.8倍;利用优化后的LrrG蛋白免疫罗非鱼后,发现其对罗非鱼抗GBS感染具有61.54%～69.23%的相对免疫保护率。研究表明,按照大肠杆菌密码子优化GBS表面蛋白LrrG,可有效提高其在大肠杆菌中的表达量,且优化后的LrrG重组蛋白仍然具有较好的免疫原性,本研究结果为基于LrrG基因工程疫苗的制备和应用提供了科学参考。