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编码鳜传染性脾肾坏死病毒结构蛋白新基因ORF90.5L的鉴定分析

文献类型： 中文期刊

作者： 王庆 1 ; 罗永文 2 ; 刘春 1 ; 曾伟伟 1 ; 张超 1 ; 石存斌 1 ; 吴淑勤 1 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所

2.华南农业大学

关键词： 鳜传染性脾肾坏死病毒;核心基因;病毒结构蛋白

期刊名称： 中国水产科学

ISSN： 1005-8737

年卷期： 2010 年 17 卷 04 期

页码： 753-760

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 鳜传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)全基因组序列于2001年完成测定,全基因组为111362bp,含有124个推测的开放阅读框(ORF)。2007年,Eaton等对12株已完成序列测定的虹彩病毒代表株进行分析比较,除了已经推测的ORF外,认为ISKNV基因组中还存在一个的核心基因(Core gene)ORF90.5L。本研究以ISKNV的cDNA为模板,根据Eaton等报道中推测的上下游位点设计引物扩增出一段963bp的PCR产物。该序列编码一个320个氨基酸的蛋白质,推测分子量为35kD,含有预测的跨膜区,与虹彩病毒属(Iridovirus)其他成员编码的肉豆蔻基膜蛋白有较高的同源性。将该片段克隆到原核表达载体pET32a(+)中,纯化表达的重组蛋白pET90.5L免疫昆明鼠获得高效价多克隆抗体。利用抗pET90.5L抗体与纯化病毒进行免疫印迹,结果表明,抗pET90.5L的多抗可以特异性识别病毒粒子中大小约为35kD的蛋白条带,ORF90.5L编码的蛋白应为病毒的结构蛋白。本研究旨在为ISKNV基因工程疫苗的研发和病源侵染机制研究提供基础参考。

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