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类猪圆环病毒P1 VP1蛋白在昆虫细胞中的表达及特性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 王凤芝 1 ; 温立斌 1 ; 何孔旺 1 ; 姚火春 2 ; 王小敏 1 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院

2.南京农业大学

关键词： P1 VP1;昆虫杆状病毒表达载体系统;RT-PCR;Western Blot;电镜

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2015 年 30 卷 04 期

页码： 90-94

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了鉴定类猪圆环病毒P1 VP1蛋白能否在体外自组装成病毒样颗粒(VLPs),首先PCR扩增P1 ORF1基因,利用p Fast BacTM1载体构建重组质粒,通过脂质体转染在Sf9细胞中表达P1 ORF1基因。然后通过RT-PCR技术及Western Blot分别从转录和蛋白质水平上鉴定该基因的表达,应用透射电镜观察该蛋白质是否形成了VLPs。结果显示,转染Sf9细胞后,第5天开始出现细胞病变;从接毒细胞中提取总RNA,经Recombinant DNaseⅠ处理除去基因组DNA后,RT-PCR能够扩增出362 bp的目的片段;收获接毒后72 h的细胞,Western Blot分析显示,P1 ORF1重组病毒样品能够与抗P1 VP1单抗发生特异性反应;电镜观察发现,该蛋白在Sf9细胞中形成了近椭圆形的包涵体。利用杆状病毒表达载体系统成功地在Sf9细胞中表达了类猪圆环病毒P1的ORF1基因,并证实在本试验条件下P1 VP1蛋白不能自组装成VLPs,为进一步研究P1 VP1蛋白的免疫学特性奠定基础。

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