文献类型： 中文期刊

作者： 张天天 ¹ ; 华再东 ² ; 任红艳 ² ; 顾浩 ² ; 周彬 ¹ ; 毕延震 ² ;

作者机构： 1.湖北工业大学生物工程与食品学院发酵工程教育部重点实验室

2.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室

关键词： FASD1基因;过表达;脂肪酸;ω-3;ω-6

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2023 年 002 期

页码： 451-459

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】研究脂肪酸去饱和酶1（fatty acid desaturases 1,FADS1）基因对不饱和脂肪酸代谢的调控作用，为揭示其分子机制提供参考。【方法】利用PCR扩增猪FADS1基因的CDS区，将目的基因与pcDNA3.1（-）骨架载体连接获得重组表达载体pcDNA3.1-FLAG-FADS1,将重组表达载体瞬时转染宁乡猪肾成纤维细胞，转染后24、48 h分别收集细胞，利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测FADS1基因的表达情况，经过遗传霉素（geneticin, G418）筛选之后获得稳定表达FADS1基因的细胞系，命名为1-4^#。利用甘油三酯检测试剂盒检测野生型和1-4^#细胞甘油三酯含量变化；利用气相色谱质谱法（gas chromatography-mass spectrometer, GC-MS）检测野生型和1-4^#细胞不饱和脂肪酸含量变化情况。【结果】成功获得过表达载体pcDNA3.1-FLAG-FADS1,在转录水平和蛋白水平检测均有过表达效果。通过G418筛选出1株稳定过表达FADS1基因的单克隆细胞。甘油三酯含量测定结果显示，与野生型宁乡猪肾成纤维细胞相比，过表达FADS1的宁乡猪肾成纤维细胞中甘油三酯的含量显著降低（P＜0.05）。不饱和脂肪酸检测结果显示，过表达FADS1后，总脂肪酸的含量极显著升高（P＜0.01）,提高1.8倍，多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid, PUFA）中ω-3 PUFA、ω-6 PUFA含量均极显著升高（P＜0.01）,二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid, EPA）、二十二碳五烯酸（docosapentaenoic acid, DPA）、二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid, DHA）的相对含量极显著提高（P＜0.01）,ω-3/ω-6值显著提高（P＜0.05）。【结论】成功构建超表达载体pcDNA3.1-FLAG-FADS1,并在宁乡猪肾成纤维细胞中成功筛选到了1株稳定超表达FADS1基因的单克隆细胞1-4^#,经检测，FADS1基因超表达能显著降低细胞中甘油三酯含量、提高ω-3 PUFA含量及占比，提高ω-3/ω-6值。