文献类型： 中文期刊

作者： 谭佳豪 ¹ ; 邹华英 ¹ ; 盛军 ² ; 王芳 ² ; 陈梦瑶 ¹ ; 宋佳 ² ; 徐甲坤 ² ;

作者机构： 1.上海海洋大学

2.中国水产科学研究院黄海水产研究所

关键词： 南极磷虾;氨肽酶;异源表达;酶学性质

期刊名称： 中国水产科学

ISSN： 1005-8737

年卷期： 2025 年 32 卷 008 期

页码： 1079-1092

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在从南极磷虾(Euphausia superba)基因转录组中筛选克隆获得一种亮氨酸氨肽酶基因EsLAP,构建重组表达载体EsLAP-pET-28a,通过共表达分子伴侣在大肠杆菌中实现可溶性表达.采用三因素三水平响应面法对诱导条件进行优化,并对其重组酶酶学性质进行系统表征.EsLAP基因全长 1569 bp,编码 522 个氨基酸,理论分子量为 55302.67 Da,等电点为 6.16.序列与结构分析表明,EsLAP具有M17 家族肽酶的典型肽酶催化结构域及底物特异性结合位点.通过响应面优化确定EsLAP最佳表达条件为:IPTG浓度 0.7 mmol/L、接种量 3%、诱导时间 19 h.酶学性质分析显示,EsLAP最适反应温度为60℃,最适pH为8.5,其中粗酶酶活为265.6 U/mL,比酶活为33.15 U/mg.金属离子Co2+和Mn2+可显著增强其酶活,其中Co2+可使酶活提高至原始水平的 296%.EDTA可以显著抑制其酶活,表明EsLAP是金属蛋白酶.β-mercaptoethanol、NaBH4、DTT等强还原剂显著抑制酶活,可以使剩余酶活降低至 10%以下.底物特异性分析显示,EsLAP对Leu-pNA具有最高的催化效率,进一步验证其为亮氨酸氨肽酶.本研究首次报道南极磷虾来源的亮氨酸氨肽酶的克隆表达及酶学特性,相关结果可作为其在食品与医药工业中用于降解N-端含亮氨酸的功能肽的潜在应用基础.