文献类型： 中文期刊

作者： 姜林林 ¹ ; 宋帅 ² ; 蔡汝健 ² ; 蒋智勇 ² ; 李艳 ² ; 勾红潮 ² ; 楚品品 ² ; 李春玲 ² ;

作者机构： 1.仲恺农业工程学院

2.广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心

关键词： 非洲猪瘟病毒;p72蛋白N末端;原核表达;间接ELISA

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2021 年 002 期

页码： 144-152

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据非洲猪瘟病毒Pig/HLJ/2018株p72-N末端基因的核苷酸序列,合成p72-N末端648 bp基因序列,连入pET-28a（+）载体进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blotting鉴定后,用重组蛋白p72-N末端作为包被抗原,建立检测猪血清中非洲猪瘟抗体的间接ELISA方法。结果显示,非洲猪瘟病毒p72-N末端648 bp基因片段成功克隆到pET-28a（+）载体中,经诱导表达获得约27 ku的重组蛋白,Western-blotting结果显示,重组蛋白与非洲猪瘟抗体阳性血清具有良好的反应原性。建立的ELISA方法结果显示,重组蛋白p72-N末端的最佳包被浓度为2.5μg/mL,待检血清最佳稀释度为1:100,该方法特异性好,仅与非洲猪瘟抗体阳性猪血清发生特异性反应,敏感度可达1:1 600;批内重复性和批间重复性变异系数均小于10%,与西班牙INGENASA公司非洲猪瘟抗体阻断ELISA检测试剂盒符合率可达93.75%。结果表明,获得的重组蛋白p72-N末端具有良好的反应原性和免疫原性,建立的非洲猪瘟抗体间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。