文献类型： 中文期刊

作者： 曹永生 ¹ ; 徐黎明 ¹ ; 赵景壮 ¹ ; 刘淼 ¹ ; 张奇亚 ² ; 卢彤岩 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

2.中国科学院水生生物研究所

关键词： 虹鳟IFN-γ2;原核表达;抗IHNV活性;抗病毒状态;保护率

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2016 年 40 卷 10 期

页码： 1586-1594

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得虹鳟IFN-γ2(rt IFN-γ2)抗传染性造血器官坏死病毒(IHNV)活性的相关数据,实验根据NCBI已发表序列设计引物,提取经植物血凝素刺激后的虹鳟头肾细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增471 bp的该基因完整开放阅读框。将该基因重组至原核表达载体p ET32a中,并转化大肠杆菌Rosetta,进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示,目的蛋白以包涵体形式表达,大小约为38.4 ku。重组蛋白经复性、纯化后在CHSE-214细胞上进行抗IHNV活性分析,结果显示,rt IFN-γ2在CHSE-214细胞上抗IHNV活性为6.63×106U/mg。Real-time PCR结果显示,rt IFN-γ2免疫后,虹鳟头肾、脾、肝中IRF-1、IRF-2、IFN-I、IFN-γ和Mx表达水平均显著提高,总体而言免疫后2天机体抗病毒状态弱于免疫后1天。攻毒保护实验结果显示,免疫后1天进行IHNV攻击时,鱼死亡率为40%,而免疫后2天进行IHNV攻击时,鱼死亡率达到80%。研究表明,原核表达系统制备的重组虹鳟IFN-γ2不仅具有体外抗IHNV活性,更能激发虹鳟的抗病毒状态,从而为虹鳟抵抗IHNV感染提供一定的保护力。