文献类型： 中文期刊

作者： 李天鹤 ¹ ; 任桂萍 ¹ ; 徐黎明 ² ; 周兵 ¹ ; 郭茉 ¹ ; 齐剑英 ¹ ; 张宇 ¹ ; 赵景壮 ¹ ; 于引航 ¹ ;

作者机构： 1.东北农业大学生命科学学院生物制药教研室

2.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

关键词： hIL-1β;单链抗体;包涵体复性;中和活性;MTT

期刊名称： 中国免疫学杂志

ISSN： 1000-484X

年卷期： 2013 年 29 卷 03 期

页码： 304-308+311

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:原核表达抗人IL-1β(hIL-1β)的scFv,并对纯化后抗体的特异性、亲和力以及中和活性进行检测,为研制治疗类风湿关节炎的小分子抗体药物奠定基础。方法:使用PCR方法从含有抗hIL-1β抗体基因的质粒中获得抗hIL-1β的单链抗体基因,将其插入原核表达载体pET-27b(+)中,构建重组表达载体pET-27b-A-hIL-1β-scFv。将该载体转化大肠杆菌Rosetta后诱导表达,经包涵体变性、复性得到可溶的抗hIL-1βscFv蛋白。利用高效液相色谱仪对其纯度进行分析后使用Western blot和ELISA方法测定scFv抗体对抗原特异性结合能力和亲和力,使用MTT的方法检测scFv抗体中和人IL-1β蛋白的能力。结果:成功地对抗hIL-1β单链抗体进行构建、诱导、表达和纯化。得到纯度为72.05%、相对分子质量约为28 ku的目的蛋白。ELISA和Western blot结果证实scFv蛋白对hIL-1β具有特异性结合能力。MTT实验结果证实该scFv抗体可以有效阻断hIL-1β刺激L929细胞的增殖。结论:通过原核表达系统得到的抗hIL-1β单链抗体,纯化后,鉴定其与hIL-1β蛋白有特异性结合能力,并且表现出中和hIL-1β的活性,为进一步研究治疗RA的小分子抗体奠定了基础。