文献类型： 中文期刊

作者： 李林林 ¹ ; 孙敏华 ¹ ; 董嘉文 ¹ ; 向蓉 ¹ ; 袁建丰 ¹ ; 邝瑞欢 ¹ ; 胡奇林 ¹ ; 张建峰 ¹ ;

作者机构： 1.广东省农科院动物卫生研究所/广东省兽医公共卫生公共实验室/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室

关键词： 番鸭细小病毒;VP3基因;重组鸡痘病毒

期刊名称： 广东农业科学

ISSN： 1004-874X

年卷期： 2015 年 42 卷 03 期

页码： 134-139+193

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据Genbank上痘病毒TK基因序列分别设计左右同源臂引物TKL-F/R和TKR-F/R,以FPV基因组为模板,扩增左右同源重组臂(TKL、TKR);PCR连接左右同源臂,使中间带有多酶切位点MCS,然后连入pBluescriptIISK(+)骨架质粒,获得的阳性质粒命名为pTK;合成反向串联表达盒:p7.5-MCS1-SV40-MCS2-P11,将表达盒插入质粒pTK的MCS位点,筛选获得阳性质粒pTKS;在鸡痘病毒早期启动子P7.5后的MCS1处插入MDPVVP3基因,晚期启动子P11后的MCS2处插入EGFPBGHpA,从而构建MDPVVP3基因重组鸡痘病毒转移载体pTKS-VP3-EGFP,对构建好的转移载体进行酶切和测序鉴定。将转移载体pTKS-VP3-EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)后,经RT-PCR和绿色荧光蛋白基因表达鉴定了MDPVVP3基因的表达,为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。