文献类型： 中文期刊

作者： 刘婵 ¹ ; 冯娟 ² ; 谢云丹 ² ; 胡万涛 ² ; 王江勇 ² ; 苏友禄 ³ ;

作者机构： 1.天津农学院水产学院;中国水产科学研究院南海水产研究所农业农村部南海渔业资源开发利用重点实验室;广州大学生命科学学院

2.;天津农学院水产学院;中国水产科学研究院南海水产研究所农业农村部南海渔业资源开发利用重点实验室;广州大学生命科学学院

3.;天津农学院水产学院;中国水产科学研究院南海水产研究所农业农村部南海渔业资源开发利用重点实验室;广州大学生命科学学院;

关键词： 罗非鱼;无乳链球菌;毒力基因;三重PCR

期刊名称： 渔业科学进展

ISSN： 2095-9869

年卷期： 2018 年 05 期

页码： 130-136

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)作为罗非鱼主要病原,传染力强、致死率高,部分鱼从发病到死亡无明显病症,难以确定鱼体是否携带该病原菌,建立适用于生产一线的无乳链球菌检测技术势在必行。根据GenBank中无乳链球菌透明质酸酶基因(hylB)、青霉素结合蛋白基因(pon A)和CAMP因子基因(cfb)的保守序列,设计3对特异性引物,对多重PCR的反应条件和体系进行优化,建立基于毒力基因的罗非鱼无乳链球菌三重PCR检测方法,并运用该方法检测来自广东省不同地区的罗非鱼组织样品。构建的三重PCR检测方法仅在无乳链球菌中扩增出3条特异性条带,而在罗非鱼和常见的水产病原菌菌株中均未扩增出任何条带,表现出良好的特异性;以无乳链球菌基因组DNA浓度7.24×10~(–5)~5.65 ng/μl为模板进行扩增,该三重PCR能检测到的最低模板浓度为1.81×10~(–3) ng/μl,表现出较高的灵敏度;运用该方法检测188个罗非鱼组织样品,其阳性检出率与常规细菌分离鉴定阳性率一致,以常规细菌分离鉴定为标准,对该三重PCR检测方法进行评价,其诊断敏感性(Dse)和诊断特异性(Dsp)均为100%。结果表明,构建的三重PCR检测方法不仅显著提高了检测的准确度和灵敏度,还可在同一反应中同时检测3种无乳链球菌毒力基因,为无公害水产品中无乳链球菌的快速检疫、水产养殖病害早期预警提供了一种快速、精准和高效的检测技术。