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牛Klf4基因重组反转录病毒载体的构建及产毒细胞株的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 辛晓玲 1 ; 吕长荣 1 ; 陈冬梅 1 ; 窦忠英 1 ;

作者机构： 1.西北农林科技大学动物医学院

关键词： 牛;Klf4基因;iPS细胞;反转录病毒载体

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2010 年 41 卷 12 期

页码： 1636-1641

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了克隆牛Klf4基因并构建重组反转录病毒载体,得到稳定的产毒细胞株,本研究设计了带有酶切位点的一对引物,以接触抑制生长状态的MDBK细胞为材料,用RT-PCR方法克隆出牛Klf4基因的开放阅读框序列,将之插入干细胞反转录病毒载体pMSCVneo构成真核表达载体pMSCV-Klf4;采用脂质体法将pMSCV-Klf4转染包装细胞PT67,通过G418筛选得到稳定的产毒细胞株,电镜观察培养液上清中的病毒颗粒,同时病毒感染NIH3T3细胞测定其病毒滴度。结果表明,本研究克隆的牛Klf4基因开放阅读框序列与已发表序列(NM-001105385)比对有99.9%的高同源性;构建的重组载体质粒可正常包装,电镜下可观察到典型的病毒颗粒,筛选出的产毒细胞株病毒滴度达7.16×107CFU·mL-1。本研究成功构建的真核表达载体pMSCV-Klf4和得到的产毒细胞株,为进一步开展有关牛iPS细胞的研究奠定了基础。

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