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山羊支原体山羊亚种TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 林裕胜 1 ; 江锦秀 1 ; 张靖鹏 1 ; 游伟 1 ; 胡奇林 1 ;

作者机构： 1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 山羊支原体山羊亚种;TaqMan;荧光定量PCR

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2020 年 42 卷 012 期

页码： 1250-1254,1281

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 山羊支原体山羊亚种(Mcc)是引起传染性无乳症(CA)的主要病原之一.为建立一种准确、快速、高通量的Mcc检测方法,本研究根据GenBank登录的Mcc ATCC27343株MCAP_0033基因序列设计1对特异性引物和探针,通过各反应条件的优化,建立了基于Mcc California Kid株的TaqMan荧光定量PCR方法,并对该方法进行特异性、敏感性和重复性试验.结果显示,该方法能特异性检测Mcc,与山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、绵羊肺炎支原体、精氨酸支原体、牛支原体、大肠杆菌、巴氏杆菌、莱氏无胆甾原体、金黄色葡萄球菌、溶血性曼氏杆菌、伪结核棒状杆菌等羊常见病原均无交叉反应,特异性较强;该方法对Mcc的检测限为10拷贝/μL,敏感性较高,而常规PCR检测限仅为104拷贝/μL;组内和组间重复性试验的变异系数均小于2%,重复性较好.利用该方法对47份肺脏组织样品进行检测,同时利用PCR方法和支原体分离鉴定法进行检测.结果3种方法均未检出Mcc,与福建省未有该病发生的报道一致.以上结果表明该方法可用于Mcc的快速检测.本研究首次建立的Mcc TaqMan荧光定量PCR方法为Mcc感染的早期快速检测提供技术支持.

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