您好，欢迎访问中国水产科学研究院 机构知识库！
中国水产科学研究院机构知识库

全部

  • 全部
  • 标题
  • 学者
  • 机构
  • 关键词

草鱼呼肠孤病毒GCRV-GD108株VP5蛋白的原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 王杭军 1 ; 叶星 1 ; 田园园 1 ; 张莉莉 1 ; 瞿兰 1 ; 张蕊 1 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室

关键词： 草鱼呼肠孤病毒GCRV-GD108株;M5基因;免疫印迹;原核表达;纯化

期刊名称： 华中农业大学学报

ISSN： 1000-2421

年卷期： 2013 年 32 卷 02 期

页码： 103-108

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据草鱼呼肠孤病毒广东株GCRV-GD108编码VP5的M5基因的cDNA序列,分别设计合成带特定酶切位点的特异引物,进行PCR扩增;通过酶切与连接,构建2种重组表达载体pET30c-M5和pColdⅡ-M5,分别转化于大肠杆菌并进行诱导表达;对培养基、诱导时间、诱导剂浓度和温度等条件进行优化,确定最适表达体系。通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定。结果显示,所构建的2种VP5蛋白原核表达载体,均在大肠杆菌中成功表达了分子质量大小(约80ku)与预期相符的重组蛋白,表达产物主要存在于包涵体中。诱导表达后的菌体经离心、洗涤与超声破碎,离心收集包涵体。包涵体通过变性、透析与复性,获得纯化的重组蛋白,其中pET30c-M5/BL21(DE3)工程菌的目的蛋白占全菌蛋白的22.5%,纯化后获得了高纯度的重组蛋白(>95%)。比较2种表达载体的表达结果,pET30c-M5具有诱导表达耗时少、获得重组蛋白量大的优势,可为下一步的研究提供足量的蛋白。

  • 相关文献

[1]鳜传染性脾肾坏死病毒主要衣壳蛋白基因的原核表达. 张敏,白俊杰,劳海华,叶星,简清,罗建仁. 2004

[2]团头鲂(Megalobrama amblycephala)两种热休克蛋白70(HSP70s)的原核表达、纯化及鉴定. 明建华,谢骏,徐跑,戈贤平,刘文斌,叶金云. 2012

[3]罗非鱼AMH基因的原核表达及多克隆抗体制备. 丁炜东,曹哲明,曹丽萍. 2010

[4]奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素前体蛋白的克隆与表达. 丁炜东,曹丽萍,吴婷婷. 2005

[5]嗜水气单胞菌气溶素的表达纯化和活性实验. 董靖,刘永涛,胥宁,杨秋红,杨移斌,艾晓辉. 2019

[6]草鱼呼肠孤病毒GCRV-GD108株VP5蛋白功能及免疫原性分析. 王杭军,叶星,田园园,张莉莉,邓国成. 2013

[7]贝尼登虫抗原蛋白的初步研究. 邹为民,谭爱萍,姜兰,张艳,陆小萏. 2004

[8]用细胞周期分析结合免疫印迹方法检测微型浮游植物细胞增长率的研究. 赖红艳,武模戈,侯建军,刘绍平. 2008

[9]尼罗罗非鱼卵黄脂磷蛋白的分离纯化与性质鉴定. 单瑞后,王松,王骏,王军,汝少国. 2015

[10]不同来源虾青素提取、纯化及定量检测方法的研究进展. 高岩,邢丽红,孙伟红,吴旭干,祖露. 2020

[11]大菱鲆血清免疫球蛋白IgM的纯化及应用研究. 魏鉴腾,陈吉祥,王淑娴,张晓华,王印庚. 2008

[12]亲和层析技术在现代蛋白质研究中的应用及新发展. 李洪利,黄倢,周丽. 2005

[13]罗非鱼肠蛋白酶的分离纯化及其性质. 吴燕燕,李来好,郝志明,杨贤庆. 2010

[14]鲤生长激素酵母工程菌的分泌表达和产物纯化. 李英华,白俊杰,简清,叶星,李新辉,罗建仁,梁旭方. 2002

[15]海洋贝类活性肽的研究现状和应用前景. 王晶,吴燕燕,杨贤庆. 2013

[16]中国对虾一种C型杆状病毒的纯化技术及形态特征研究. 孔杰,石拓,刘萍,包振民,郭福生,相建海. 1997

[17]牙鲆卵原细胞鉴定、分离及纯化的初步研究. 孙朝徽,于清海,周勤,宋立民,姜秀凤,王青林,任建功,王玉芬,任玉芹. 2018

[18]虾肝肠胞虫(EHP)孢子的纯化和计数. 赵若恒,高雯,邱亮,李晨,谢国驷,黄倢. 2019

[19]黄鳍棘鲷血清IgM的纯化及兔抗血清的制备. 刘振兴,张殿昌,苏天凤,姜巨峰,龚世园,江世贵. 2008

[20]扇贝超氧化物歧化酶的纯化及性质研究. 王跃军,孙谧,李民,马英杰,向葆卿. 1998

作者其他论文 更多>>
置顶
购物车
反馈

© 京ICP备09089781号-29 主办单位：中国水产科学研究院

学术资源： 中国农业科学院 农业专业知识服务系统 农科联盟资源共建共享平台 中国农业科技文献与信息服务平台 中国农业期刊集成服务平台