文献类型： 中文期刊
作者： 韩猛立 1 ; 杨井泉 1 ; 姚守秀 2 ; 黄新 1 ; 薄新文 1 ; 钟发刚 1 ;
作者机构： 1.新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室
2.石河子大学动物科技学院
关键词： SYBR GreenⅠ;实时荧光定量PCR;牛;α-干扰素;β-干扰素;γ-干扰素
期刊名称： 中国预防兽医学报
ISSN： 1008-0589
年卷期： 2010 年 32 卷 10 期
页码： 762-767
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为建立灵敏度高、特异性强、能够快速检测牛α-、β-、γ-干扰素(BoIFN-α、BoIFN-β、BoIFN-γ)mRNA的实时荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank中登录的BoIFN-α、BoIFN-β和BoIFN-γ基因序列,分别在其保守区内设计并合成特异引物,以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)mRNA为内参,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。将BoIFN-α、BoIFN-β和BoIFN-γcDNA分别克隆到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α内,经PCR及测序鉴定,将得到的阳性重组质粒制备成标准品,建立SYBR Green荧光定量PCR标准曲线并分析溶解曲线,进行灵敏性、特异性和重复性试验。结果表明:BoIFN-α、BoIFN-β、BoIFN-γ和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×101copies/μL～1×107copies/μL内均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,特异性和重复性较好。本研究建立的检测牛IFN-α、IFN-β和IFN-γmRNA的实时荧光定量PCR方法,为牛IFN mRNA水平上的定量分析奠定了基础。
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