文献类型： 中文期刊

作者： 张培 ¹ ; 李志辉 ¹ ; 赵莲 ¹ ; 赖晓芳 ¹ ; 高焕 ¹ ; 李健 ¹ ; 阎斌伦 ² ;

作者机构： 1.;淮海工学院海洋生命与水产学院江苏省海洋生物技术重点实验室;江苏省海洋生物产业技术协同创新中心;江苏省农业种质资源保护与利用平台;中国水产科学研究院黄海水产研究所

2.;淮海工学院海洋生命与水产学院江苏省海洋生物技术重点实验室;江苏省海洋生物产业技术协同创新中心;江苏省农业种质资源保护与利用平台;中国水产科学研究院黄海水产研究所;

关键词： 脊尾白虾;GAPDH;内参基因;组织;蜕壳后时间点

期刊名称： 中国水产科学

ISSN： 1005-8737

年卷期： 2017 年 05 期

页码： 1003-1012

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为比较甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、18S rRNA和β-actin基因在脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)作内参基因的优劣,本研究采用同源克隆和RACE技术,克隆了脊尾白虾GAPDH基因全长cDNA序列(GenBank登录号:KX893516),通过实时荧光定量PCR(quantative real-time PCR,qPT-PCR)技术,检测3种基因在脊尾白虾不同组织及不同蜕壳后时间点的表达量变化,在此基础上进行内参稳定性分析。结果显示,脊尾白虾GAPDH基因全长1514 bp,开放读码框1002 bp,编码333个氨基酸,二级结构预测显示GAPDH蛋白具有一个高度保守的NAD~+结合功能域(NAD binding domain)和行使糖运输和代谢的催化功能域。分析qRT-PCR结果并结合ge Norm、Norm Finder和Best Keeper 3种软件的分析发现,在不同组织和不同蜕壳后时间点,3种内参基因的稳定性由高到低依次为18S r RNA、GAPDH、β-actin。因此,在脊尾白虾不同组织和不同蜕壳后时间点的定量分析中,选取单内参基因时,推荐使用18S rRNA为内参基因,双内参时推荐18S rRNA和GAPDH,而18S rRNA、β-actin和GAPDH在其他生理条件下作内参基因的稳定性还有待进一步研究。